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IHC-Vorbereitung

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Material und Ausrüstung für die Immunohistochemie
  • Gefrorene oder in Paraffin eingebettete Gewebsschnitte
  • Kryo-Einbettmedien (z.B. OCT)
  • Sukrose
  • 4% Paraformaldehyd (PFA)
  • Mikrotom
  • Objektträger aus Glas
  • Deckglas
  • Kühlschrank
  • Inkubator
  • Xylol
  • Ethanol (verschiedenes Prozentgehalt)
  • Kochgelegenheit
  • Primär- und Sekundärantikörper
  • Hämatoxylin
  • Serum
  • Zitratpuffer (pH 6)
  • Zitratpuffer (pH 9)
  • Diaminobenzidin-Tetrachlorid (DAB)
  • Mikroskop
Membrantransfer
Citrate Buffer For 1000 ml 1x TBS For 1000 ml
10 mM Tris-sodium citrate ₂H₂O 2.9 g 20 mM Tris-base 2.4 g
1.9 mM citric acid H₂O 0.4 g 150 mM NaCl 8.7 g
Adjust pH to 6.0   Adjust pH to 7.6  
Add ddH₂O to 1000 ml   Add ddH₂O to 1000 ml  

 

Handhabung der Gewebsschnitte

Die Gewebsschnitte werden auf einen Objektträger aus Glas platziert. Durch Lufttrocknen und zusätzliches Backen im Inkubator wird die Gewebeadhäsion gefördert. Nicht gebackene Schnitte können bei 4°C für die spätere Verwendung aufbewahrt werden.  Beachten Sie aber, dass sich die Lagerung in einem für jedes Protein unterschiedlichen Ausmaß auf das Antigenpotential auswirken kann.  Es wird daher empfohlen, die Lagerdauer so kurz wie möglich zu halten bzw. frisch präparierte Schnitte zu verwenden.